[香樟树]桉树长链脂肪酰辅酶A合成酶基因9基因

　　上桉树转录数据的基础上，同源基因的候选CcLACS9拟南芥AtLACS9筛选并克隆和序列相似性为75％。测CcLACS9相关联的软件具有植物的亚科LACS的成员三个基序特性，和N-末端含有质体的局部信肽。互补实验中酵母缺陷型Δlacs，所述突变体酵母转化有CcLACS9用油酸作为唯一的外源脂肪酸返回到正常生长，显示出CcLACS9具有酰基辅酶A合成酶的功能典型的脂肪。
　　了确定CcLACS9是否参与桉树种子油的生物合成，种子发育期间它的表达模式和表达水平和种子油积累之间的关系具有已经进行了更详细的研究。量PCR实时分析表明CcLACS9基因主要表达于细胞核和鲜花和在细胞核的相对表达比在根部更高17.74倍。机测定了成熟桉树种子的千粒重，种子油含量和中链脂肪酸的比例。据仁油含量，测试群分为三个级别：高，中，低，并且从每个等级选择了三个个体植物，相对油含量和相对表达CcLACS9每月进行一次分析。果表明，在种子发育初期，核心油和CcLACS9含量持续增加，两者呈正相关。察8月CcLACS9表达的峰值。9月底后，核心含油量趋于稳定，但CcLACS9的表达保持稳定。

　　更高的水平但具有下降趋势，两者之间没有显着的相关性。LACS亚家族在植物进化中更保守，并且同源基因在不同植物中具有相同的功能或相似的功能。果表明，CcLACS9可能具有相似的生物学功能AtLACS9，它在合成和桉树种子油的酯积累了重要的作用。键词：桉树，酰基-CoA合成酶长链脂肪酸9籽油，基因表达的分析，检测的酵母互补分类号：Q943文献代码：AA文章编号：1000-3142（ 2018）10-1335-11Abstract：在这项研究中，将编码的cDNA的AtLACS9同源基因被鉴定和克隆转录数据樟树的基础上，具有AtLACS9分享75％的序列相似性和被记录关于CcLACS 9.几种序列比对显示CcLACS9具有三种特异性植物LACS基序和质体靶向。用油酸作为底物，CcLACS9可以激活在酰基辅酶A硫酯的游离脂肪酸中的突变体缺陷的酵母互补测试LAKES特异性表达分布到织物上进一步显示CcLACS9是主要通过实时PCR分析在发育种子和花中表达，但在叶和茎中表达较少。CcLACS9在细胞核与根中的相对定量表达为17.74倍。CcLACS9的存在下参与生物合成的种子油中樟脑芯，CcLACS9的表达和种子油含量之间的相关性进行了研究。11月随机抽取30株成年樟树种子，种子重量，种子油含量和癸酸百分比。
　　据种子油含量，30人被分为三组和三个具有代表性的植物各组由产量籽油组合和CcLACS9的表达水平被选择用于分析发展核心。有三组的结果表明，种子含油量和CcLACS9的表达水平持续六月上升至8月，和他们之间有一个显著的正相关关系。CcLACS9在细胞核中的峰值表达水平在8月份被发现。月，种子油的含量趋于稳定，但是，CcLACS9维持表达的高水平和口腔具有种子油的植物的内容，同源染色体的基因亚科湖泊倾向于认为功能commune.Ces结果意味着，CcLACS9可以在樟树的核心发挥籽油积累了重要的作用。键词：樟树，长脂肪链 - 辅酶A合成酶aycl 9，种子油，基因表达的分析，桉树酵母补体（樟树）是树种潜在可持续能源之一中国的石油占其干重的55％至65％。要成分由单宁酸和月桂酸组成，比例超过90％（赵曼丽等，2012）。宁（C10）和月桂酸（C12）是中链脂肪酸具有低凝固点，良好的氧化稳定性，吸收，相容性和快速的延展性。们广泛用于工业，医药，保健和化妆品。牧业和其他行业（Meng Xue et al。2012，Liu Mengyu et al。2016）。树是在南方各省普遍：据统计，一个在湖南省会产生超过400万吨，每年籽油，提供了良好的发展潜力作为一种稀缺资源中国中链脂肪酸。
　　是，目前，桉树种子的油尚未开发大规模和缺乏竞争的品种是关键因素之一。为一个高度杂合的木本植物，种子油在桉树的内容和组合物有很大的不同，它为目标筛选和改良品种的栽培提供理论结合的指标是特别重要的。强研究桉树油，尤其是关键基因的提取的生物合成，以填补相关基础研究的空白，将有助于未来改善的品种和发展文化桉树油工业。述aycl辅酶A合成酶长链脂肪酸（LACS）可以催化脂酰CoA的从游离脂肪酸（C14-C20）的形成参与在植物中脂质代谢的各种反应，在显影，脂肪酸和种子的延伸。即三酰基甘油形成，起到生物过程，诸如β氧化，生物膜和细胞信号转导的合成（金丝，1997中起重要作用;库拉纳等人，2010 ）。高等植物中，LACS是具有共同的特征，以形成腺苷酸（的PPA），其中包含一个高度conservé1图案酶的超家族的一类蛋白质的保守序列的（T [GF] -S [G组合物] -G [ST] -T [SE] -G [S] -XP [M]）和模式2（Y [LWF] -G [SMW] -XT [A] -E）（注X表示任意的域结合MPA氨基酸）具有相似的催化反应机理：所述第一步骤形成的酰基-AMP中间体消耗ATP和同时释放的焦磷酸;第二步是将酰基转移到最终受体。释放AMP（Babbitt等，1992，Stuible等，2000）。合结构域AMP是主要执行第一阶段反应和还识别为腺苷合成酶基因的超家族的成员的特性的探针序列（Stuible等人，2000）。一个保守的结构域由在LACS高度保守的约25个氨基酸残基被称为酰基辅酶A合成酶（ACS），任选的脂肪酸的结合位点和活化位点的信号序列ACS（Mashek等，2007）。外，由45至70不均匀的残基的单粘合剂是区分家庭SCA的，这是必要的LCAS的成员可以实现正常的生物学功能（Steinberg等的LAC其他成员的特征序列2000，Iijima等，1996）。物LACS亚家族成员的功能研究在模式植物拟南芥中更彻底和完整。南芥已鉴定出9种编码LAC。缺陷的酵母互补测试证实，所编码的蛋白质的7具有脂酰辅酶A合成酶的活性较强，而在体外催化试验，9个编码的蛋白质在它具有高活性，但不同的底物偏好（Shockey等，2002）。达分析表明，除了AtLACS5（花中特异性表达），其他成员普遍在各种组织中转录，但表现出的器官或组织（肖基等，2002）显著特异性。科AtLACS的成员有不同的亚细胞定位，并发挥与脂肪酸脂代谢的不同节点的重要作用，也对设备的正常植物组织的发展（富尔达等人，2002年是必不可少的; L等2009年，Schnurr和Al 2004，Jessen等2011）。中，AtLACS9基因主要表达于显影莲座的种子和叶子，及其编码的蛋白（At1g77590）被示出在质体膜（Schnurr等人，2002）。然T-DNA的插入没有引起突变lacs9-1的发展和表现型显著变化，长链脂酰辅酶A合成酶的叶绿体的活性表示超过野生对照个体的10％，表明AtLACS9是质体的主要长度。基-CoA合成脂肪链，但其他几个的LAC的存在下参与的脂肪酸从质体（Schnurr等人，2002）的传输。着，识别由双突变证实部分冗余和AtLACS9 AtLACS1功能，并已在种子油的合成（Zhao等人，2010）中发挥了重要的作用。料和方法材料和关键试剂从桉树的江西科学院森林的第十和第二十年之间的小样品。因LACS9桉树的序列已经从五个类型的化学品（linoléculaire酒精，桉树，樟脑，冰片和异厄立特里亚）由工程技术研究中心建成参考转录组数据公共森林管理局的桉树。（蒋香梅等，2014）。RNA提取试剂盒（对于RNAiso富含植物组织多糖），使用TaKaRa LA Taq酶，第一链试剂盒SYBR绿定量PCR我，琼脂糖凝胶回收试剂盒和试剂盒克隆的cDNA合成试剂盒PMD18-T购自TaKaRa。母表达载体pYES2和YB525应变缺陷酵母（酿酒酵母）惠赠江苏的谈晓丽大学教授提供。条长链脂肪酸购自Sigma。典试剂和载体购自Shanghai Biotech，克隆测序由Shanghai Biotech进行。法桉树种子的小样品，用1000吨谷物的质量和的组合物和在随机选择的油的组合物，所选择的30种桉树与similaire.En生长2015年11月收集，洗涤，干燥种子并用千分之一克电子秤称重。数千粒。石头剥离并干燥后，称取100克种子，并通过索氏提取法提取油。的重量称量和个体种子油的油收率为calculé.La含量和种子油的每个中链脂肪酸的相对含量通过色谱法测定气相质谱（GC-MS）。树LACS9候选基因筛选和Pfam数据库（http://pfam.xfam.org/）寻求并监管局家庭的马尔可夫模型文件隐藏域特性（第Pfam：PF00501）和HMMER3程序。序0（http://hmmer.janelia.org/）5种化学类型的桉树叶的组织的注释转录的序列;根据注释的结果，使用AtLACS9参考过滤桉树转录注释为超家族AAE重叠群的所有序列。列构建，局部爆炸X已被执行并且该序列重叠群超家族桉树AAE进行比较和同源重叠群AtLACS9根据相似度.The拼接软件CAP3序列中选择进行以完成LACS9桉树基因的电子克隆。因桉树LUCS LACS9在4 - 7月2016年，克隆五个棒组织，叶，根，花和桉树种子收集并在液氮中冷冻。据TaKaRa RNAiso的说明，对富含多糖的植物组织提取上述组织的5种总RNA。DNA酶I的消化后，将残留DNA被除去，总RNA 50ng的取和第一链cDNA用合成试剂盒PrimeScript第一链C合成。体到五个化学类型桉树转录数据提供的设计电子克隆序列LACS9基因和引物用于使用五种的组织的cDNA通过PCR特异性地扩增桉树LACS9基因桉树。异性引物为F：5-TTGCGAGAAATGGCTGATGAAT-3; R：5-AAGTTCCAACCAACGGATTPCR-3。反应体系的总体积为20微升，其中使用LA Taq 0.2微升，1微升的cDNA，缓冲器10×使用LA Taq 2微升，上游和下游引物0.5微升（10μmol·L-1 ）和1μLdNTPs（2.5mmol·L-）。1）和ddH2O14.8μL。PCR反应程序：预变性在95℃下3分钟，95℃30秒，56℃30秒，72℃2分钟，72℃10分钟，35个循环。过1％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，并切下对应于目标产物的电泳条带。复后，将其连接到PMD18-T克隆载体和热转化到感受TOP10大肠杆菌细胞在42℃下阳性克隆通过PCR进行筛选，送上海生物技术测序。因序列的分析和识别桉树LACS9使用可视化工具Scanprosite结果发现保守结构域信息注释的基因桉树LACS9，使用CLUSTALX软件用于对准多个序列来计算桉树基因LACS9之间的序列相似性和其他植物直系同源基因; 4.使用SIGNALP 1个软件例如服务器和预测蛋白质预测的桉树LACS9的亚细胞定位引入拟南芥，油菜，花生等植物LACS9，并分析该行的关系通过MEGA6.0软件对植物的LACS9基因进行研究。因桉树LACS9从4月至2016年7月的组织特异性表达的分析，花，茎，叶，种子的内核和桉树根组织中提取和提取总RNA。用肌动蛋白基因作为内部对照基因（F：5-CCTCGACACAGGCGTTAT-3 ; R：5-CCATGCTCGATGTCATTCA-3），使用实时定量PCR法（定量RT-PCR）来检测表达LACS9桉树基因在不同的组织位置桉树qRT-PCR的引物F：5-ACCTGCCTTTGGCTCACA-3 R：5-AAGGCGATCCGTATCCAA-3。PCR反应在Bio-RAD C1000TM热循环仪上进行。反应体系的总体积为20微升，其中包括（50纳克的cDNA，2×SYBR绿色PCR的qPCR 10微升，10μL·L-1阳性和阴性的引物各1微升，超纯水，20微升）反应模式：95°C 2. Min; 95°C 15s，58°C 30s，72°C 20s; 40个循环，加入溶出曲线;每个样品重复3次。考2-ΔDCT（Livak和Schmittgen，2001）计算实验数据统计。量前一年的种子油的结果，测试的样品被分为三类：油产率为60％以上，其对应于高品质。均质量的油产率在50％到60％之间，低质量的油产量低于50％。每个水平，随机选择3棵树作为代表性植物：从2016年5月到11月，收集桉树种子并去皮。些种芯被用于提取种子油，油含量和组成进行测定，以及总RNA的提取和LACS9基因在发展的相对表达桉树种子。过索氏提取提取种子油，通过GC-MS测定含量和组成。LACS9基因的总RNA提取和实时定量荧光表达分析与上述相同。计SPSS统计软件19.0用来分析基因LACS9在种子发育的表达和含油量之间的相关性。陷的酵母互补实验桉树LACS9酵母菌株YB525（faa1Δfaa4Δ）缺乏必要的LACS到外源脂肪酸的活化和不能正常在基本培养基中生长。通常用于分析外源性LACS活性（Zhu Fuge等，2009）。组质粒的pYES2-CcLACS9和pYES2中对照质粒分别转化到感受态细胞中有缺陷的酵母YB525，以及正转化克隆通过由尿嘧啶默认固体培养基筛选。机选择阳性克隆，并通过尿嘧啶默认在液体培养基中生长，直到对数期中期和finale.Les酵母细胞通过低速离心收集，用加入2mol L-1山梨醇和冲洗两次。细胞在默认尿嘧啶液体培养基（含有2％半乳糖和无葡萄糖）和培养4至5小时，同时搅拌以诱导大规模外国靶基因的表达被转移。菌溶液抽入与通过尿嘧啶默认（含有2％半乳糖和0.1％的TritonX-100），和脂肪酸C18液体介质中的1％：1〜98微摩尔·添加L-1作为外源脂肪酸。培养物在30℃下搅拌约84小时，并通过使用分光光度计测量细胞密度来测量生长速率。果和讨论1000级颗粒和小桉树样品中的种子油含量的重量已在十一月被收集，1000种子重量，最大值为184.23克，118最低，62克，平均值149.92克。所测试的小样本，2/3桉树种子之间有140和180克，16.92方差，其对应于“正常”的分布的千粒重。验样品的油脂产率最高，为76.78％，最低的为42.48％，平均为57.37％。15株，产率为60％以上的油，12个菌株具有小于50％和50％和60％的分布之间3株“极化”。肪酸组成的分析表明，在测试的桉树芯中链脂肪酸的相对含量为95.71％，其中94％和97％之间变化，除了个体植物。链脂肪酸（平均62.36％）的单宁酸含量比月桂酸（33.35平均值）和两者呈负相关的显著较高相关（r = -0.86，p < 0.01）。调查的五个指标，方差的值在千粒重>油的收率>柠檬酸的相对含量>上月桂酸>比的中链脂肪酸的相对含量更高表达。树LACS9基因和五个Unigenes在布上板桉叶（表1），其可以是拟南芥基因LACS9的直系同源物的序列中的数据被发现的cDNA序列或序列Contings的克隆的筛选。个Unigenes或Contings序列已经由获得含有完整开放阅读框桉树LACS9基因的CAP 3软件和电子克隆剪接。决于用于电子克隆的引物的设计中，完整的cDNA序列的扩增通过PCR，使用五种类型的组织cDNA茎，叶，根，花和种子桉树的，分别进行的。过1％琼脂糖凝胶电泳检测是清楚的。有乐队（图1）。克隆测序，扩增的带有2356 bp的长度并含有2094个碱基的编码称为CcLACS9的697个氨基酸的多肽的编码区序列。EditSeq软件预测CcLACS9为86.83 kDa的具有7.39的等电点在生理中性条件下微碱性。ProtParam软件的在线分析表明，CcLACS9含有几个亲水区并且是亲水蛋白。交GeneBank数据库并获得登录号MF966481。树LACS9序列鉴定和进化结合结构域的分析到GPA（PROSITE PS00455）[LIVMFY] - {E} - {} VES - [TSG] - [STAG] -G [ST] - [ STEI] - [SG] - X- [PASLIVM] - [KR]是ACS植物家族的特征。了确定CcLACS9是否是植物ACS家族的成员，使用Scanprosite Results可视化软件分析其保守结构域。果表明（图2：A）在高度保守的AMP结合结构域由12个和10个氨基酸残基（由图中的*标记），以的的256-267和452-462位CcLACS9蛋白的序列分别为;位置531-560的含有30个氨基酸的（标记）组成的高度保守的ACS信号序列，表明CcLACS9是ACS基因植物的典型的家庭成员。外，结合结构域和AMP信号ACS序列之间，也存在由71个氨基酸残基的保守结构域（第354-424标记），它是一个结合结构域的连接子特别来自LACS亚科。合结构域在不同物种和不同成员之间的序列长度不同。之，CcLACS9具有ACS家族的两个共同的特征和真核生物的LAC的结合结构域，香樟树其可以基本上确认为包含在桉树亚科LAKES的成员之一。重比对CcLACS9与植物LACS的其它同源基因亚家族已经表明，对AGP，所述ACS信号序列和结合结构域与结合剂的结合结构域的高度保守（图2：B）。CcLACS9和油棕（油棕），莲花（莲），无油樟，雷蒙德氏棉，芝麻，拟南芥，枫树序列的相似性的同源基因麻风树），甘蓝型油菜，玉米，蓖麻，等等分别为80％，81％，80％，78％，78％，75％。78％，75％，75％和76％，这表明LACS9在植物中的进化中高度保守，并且可以具有相同或不同植物类似的功能。LACS9线的分析表明，CcLACS9 LACS9单子叶和双子叶植物像LACS9乳酸乳球菌之间有所变化，结果与桉树的陆生植物不断变化的状态保持一致。4.预测和SIGNALP 1Server，蛋白质和其它软件，用于预测的亚细胞定位，预测，CcLACS9在质体局部的，这表明它可能执行相同的任务AtLACS9输送合成出来的脂肪酸质体，然后调节种子核中的脂质合成。重要作用。桉树组织通过实时PCR分析中LCOS9桉树的基因的表达，叶，茎，根和核的种子，并通过实时PCR分析，使用桉树的肌动蛋白基因作为内部参考。可在图3中可以看出，CcLACS9基因在花，叶，茎，根和内核表达，但大量表达具有明显的差异。中，基因具有CcLACS9在花和种子的晶粒最明显的优势表达，随后叶组织，和三个的表达水平比在其它组织中高得多。根部CcLACS9的基因的表达水平被设定为1，并且在植物的茎，叶，花和发展的环中的相对表达水平分别为4.75，9.31，15， 82和17.74。树幼苗的前期开发油含量与CcLACS9基因的表达相关联：根据种子的油含量的核心，样品的小群体测试的桉树被分为上（> 60％），平均（50％-60％）和更低（<50％）。）三个等级。每个类中随机抽取三棵桉树，以分析每个发育阶段的籽粒含油量。2016年6月至11月，每月收集桉树种子并剥离种子。6示出了在显影和桉树种子的膨胀（6- 8月）的开始，籽晶（油产率）的油含量示出快速增长的九月至趋势11月，种子逐渐发展。
　　成熟阶段，谷物油含量缓慢增加至停滞。一级桉树的含油量在8月开始显着，并一直持续到成熟（11月）。整个开发期间，每种植物中不同脂肪酸的比例通常是稳定的。此，我们确定通过实时PCR在各种等级桉树幼苗的发展变化CcLACS9基因并研究了该基因和内容在油料种子中的表达水平之间的关系。6显示，相比5月初种子发病初期，在细胞核的基因CcLACS9表现表达六月至十一月期间显著上升，以及表达的峰值出现在8月。同一时期，CcLACS9基因的相对表达在不同等级之间没有显着差异，并且表现出相似的空间和时间表达模式。两者之间的相关性通过SPSS 19.0软件，它揭示了种子的油含量和种子发育的基因CcLACS9早期（六月至八月的相对表达之间的显著正相关分析）（r = 0.96）;在十一月，有种子的油含量和CcLACS9基因相关（r = 0.13）之间无相关性显著，但两者保持在一个较高的水平。Eucalyptus LACS9可以恢复缺陷酵母YB525的正常生长。CcLACS9基因的CDS区域插入到用限制性酶连接的pYES2的多克隆位点，然后通过测序和消化用限制性酶验证。Le plasmide dorigine contrôle pYES2 et le plasmide recombinant pYES2-CcLACS9 ont été transformés dans la souche de levure défectueuse YB525， respectivement， et les transformants positifs ont été sélectionnés et cultivés dans un milieu liquide duracile par défaut contenant C18: 1 (acide oléique) comme seule source de carbone， et soumis à une oscillation à 28 ° C. Phase cultivée à mi-logarithmique (environ 84 h). Le test de la valeur OD600 a montré que les cellules de levure défectueuses transformées avec le plasmide recombinant pYES2-CcLACS9 pouvaient croître normalement， tandis que les transformants transformés avec le plasmide pYES2 dorigine ne pouvaient pas se développer. Les résultats de lexpérience ont indiqué que CcLACS9 était capable de compléter le type déficient en levure et quil avait démontré une activité dacyl-CoA synthétase grasse (Fig. 7). Selon lenquête， la teneur moyenne en huile de diverses espèces de Polygonaceae， telles que le scorpion， le Shenshui， le Maobaopi， lAubépine， le Dayemu， le Jiangsan， le Jiangnan et le Hainan， dépasse 50%. Lune des espèces darbres les plus importantes pour le développement énergétique de la biomasse (Bhu Biqin et al.， 2014). Cependant， à l’heure actuelle， les ressources nécessaires n’ont pas été utilisées ni développées efficacement: un grand nombre de graines d’eucalyptus tombent et sont même difficiles à traiter en tant que "produits négatifs" dans le verdissement des routes. Le manque de variétés compétitives en est l’une des principales raisons et doit être ciblé. Elevage de variétés huileuses. Parmi les 30 petites populations deucalyptus testées dans cette étude， la différence entre le poids en graines de 1 000 grains et le rendement en huile de graines était significative， et les valeurs extrêmes de différence étaient respectivement de 65，61 g et 34，3%， ce qui indique quil existe un très bon dépistage de lhuile deucalyptus dans la nature. Grand espace de reproduction. Il ny a pas de corrélation significative entre le poids de 1000 grains et le rendement en huile， et les deux doivent être considérés de manière exhaustive pendant le processus de sélection. La synthèse de novo des acides gras végétaux débute dans le plastide et est suivie dune polymérisation continue avec du malonyl-ACP et de lacétyl-CoA comme substrats de départ et la chaîne carbonée de lacyle est allongée à une fréquence de 2 carbones par cycle. Jusquà la synthèse de 16 à 18 atomes de carbone dacyle gras saturé-ACP (Brown et al， 2006). Les acides gras insaturés libres se forment à leur tour sous laction de la Δ9 stéaryl désaturase et de lacyl-ACP hydrolase (Kachroo et al， 2007). Afin de compléter la synthèse de substances telles que le triacylglycérol， la cire， la kératine et le bois résineux， une grande partie des acides gras insaturés libres doit être transportée hors des plastides sous forme dactivation de lacyl-CoA， qui est véhiculée par les LAC. Les données expérimentales indiquent quAtLACS9 joue un rôle important dans la synthèse et laccumulation de lhuile de pépins dArabidopsis (Schnurr et al， 2002). Dans cette étude， la similarité entre la séquence du gène CcLACS9 et le gène AtLACS9 était de 75%. La localisation subcellulaire prédit sa localisation dans les plastides et son expression dominante dans les graines， suggérant quil est très probable quil soit utilisé comme gène orthologue AtLACS9 dans la synthèse de lhuile de graine deucalyptus. Il joue un rôle important dans le processus d’accumulation. Les fruits commencent à porter leurs fruits à la fin du mois d’avril， période de l’expansion rapide des fruits et de l’accumulation de l’huile de graines， de mai à août， puis graduellement à maturité. CcLACS9 a été constamment régulé positivement au début du développement de la graine (de mai à août) et son expression était positivement corrélée à la teneur en huile des grains de la graine， suggérant à nouveau quelle joue un rôle important dans la synthèse et laccumulation de lhuile de graine deucalyptus. Après la maturation des graines (après septembre)， il nexistait aucune corrélation significative entre le niveau dexpression de CcLACS9 et la teneur en huile des grains.Le niveau dexpression élevé de CcLACS9 pourrait être principalement destiné à compenser la consommation dénergie causée par la respiration et à maintenir léquilibre dynamique de la teneur en huile des noyaux. Il ny avait pas de corrélation significative entre la différence dexpression du gène CcLACS9 et la différence de teneur en huile entre différentes plantes， ce qui suggère que dautres facteurs sont impliqués dans la régulation de la synthèse de lhuile de graine. Lhuile de graine deucalyptus est riche en acides gras à chaîne moyenne et constitue un bon matériau pour étudier le mécanisme de biosynthèse des acides gras à chaîne moyenne. Acyl-ACP hydrolase est lun des gènes clés régulant la synthèse des groupes acyle gras à chaîne moyenne dans leucalyptus (Yuan et al， 1995)， mais on ignore si CcLACS9 active les acides gras libres avec une sélectivité en longueur de chaîne. Dans cette étude， nous avons délibérément comparé les caractéristiques de séquence LASS9 de plantes UFA (acides gras inhabituels)， notamment deucalyptus， de palmier à huile et de ramie， avec des plantes courantes telles quArabidopsis thaliana， le soja et le sésame.Les résultats ont montré que la plante LACS9 était de type relativement conservateur. Membres de la sous-famille LACS， la similarité des séquences de gènes homologues entre toutes les espèces variait de 75% à 81% et il n’y avait pas de différence significative en ce qui concerne la présence de motifs. Les arbres ont montré que le système CcLACS9 avait été mis au point entre le palmier à huile， le maïs et d’autres monocotylédones LACS9 et Dicotyledon LCOS9， tels que le sésame et le camélia， ce qui coïncidait avec le statut évolutif de l’eucalyptus comme eucalyptus. LACS9 dérivé de plantes UFA ne sest pas agrégé spécifiquement sur une branche évolutive. Dans les études microbiennes sur les animaux (Lindner et al， 2006; Kasuya et al， 2009; Meng et al， 2010)， lacyl-CoA synthétase (MACS)， un acide gras à chaîne moyenne， "active spécifiquement" les acides gras à chaîne moyenne. Le MACS du peuplier a également une activité significative sur les expériences in vitro sur lacide hexanoïque， lacide citrique et lacide citrique (Cao Shan et al.， 2016). Cependant， aucun MACS localisé dans les plastides na encore été trouvé et des doutes subsistent quant à la fonction de transfert dacides gras à chaîne moyenne dans / hors des plastides. La présence dun transfert / exfoliation spécifique dacides gras à chaîne moyenne médiée par MACS dans leucalyptus doit faire lobjet dun complément détude.
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