总结：总DNA提取方法牛蒡使用DNA提取试剂盒BIOSPIN植物基因组（目录号BSC13S1目录号BSC13S1B）和“TIANGEN”台进行了研究（猫＃DP305-03）。果表明，常见的试剂盒目录号BSC13S1比目录号BSC13S1B试剂盒更好的提取DNA多糖植物多酚和DNA Bozha目录号BSC13S1试剂盒的提取效果比更高天根Cat试剂＃DP305-03。框通过试剂盒方法提取的牛蒡叶中的总DNA可以通过PCR验证，以满足后续分子生物学实验的要求。键词：牛蒡; DNA提取;改进的试剂盒号码CLC Q946.2文档标识代码方法的项目编号1007-7731（2019）（02-03）-0007-03Résumé：在该实验中，用于提取的总DNA的试剂盒，改性其是植物的提取试剂盒的基因组DNA BIOSPIN（目录＃BSC13S1＆猫＃BSC13S1B）和DNA提取试剂盒的植物基因组“TIANGEN”（目录号DP305-03）。实验结果表明该猫＃BSC13S1的放大的结果比猫＃BSC13S1B和猫＃DP305-03.PCR说总DNA可用于关键生物学后续研究moléculaire.Mots更好：香樟（Cinnamomum kanehirae Hay）;提取总DNA;改性试剂盒前言樟kanehirae干草是台湾，燃料生长势强，强和高型质量的一个独特的本质，以及优良的景观本质上，它的木材是高品质的原料家具制造和木雕。是一种重要的工业原料：其木本寄生真菌樟芝（Antrodia camphorata）在治疗癌症等方面具有很大的药用价值。“红宝石森林”[1-4]。外旷野，也可用于樟芝，并且通过牛蒡栽培樟芝有效活性成分的人工栽培牛蒡远远优于桉树生长其他aconites的[5] 。此，近年来，在中国大陆进行了引进研究。年来，随着提高人民健康意识的提高，市场对高品质的香樟樟芝的需求增加，生活质量，但在同一时间，品质和身份的主机奉献，牛蒡，必须得到保证[5]。前，仅通过形态分类难以识别牛蒡的特性，需要建立牛蒡分子鉴定技术。分子水平上研究遗传资源和牛蒡遗传基础是牛蒡研究的一个重要方面，高质量总DNA的生产是分子生物学研究的基础。
Huang等人[6]已经分离出的3种属牛蒡的15个微卫星序列，并认为这些微卫星序列有拷贝的在三个工厂的特定数目和可用于物种的辅助识别。于植物含有大量的多糖和次级代谢产物，DNA的提取带来了一些困难。此，笔者探索了牛蒡DNA提取技术，旨在寻找获得牛蒡总DNA的更好方法，为生物学研究提供理论依据。子牛蒡。料与方法牛蒡叶收获Mayanling林场龙海市福建省五月和十一月2017牛蒡从研究所的南支介绍在台湾的工业技术。机选择若干幼叶，在非常低的温度下放置在一个塑料自封袋并用不同颜色的硅胶快速干燥，然后报告给实验室和储存在冰箱在-80℃下总DNA提取方法使用两种DNA提取方法，即Biospin基因组DNA提取试剂盒方法（以下称为“Bori试剂盒方法”）。）和“TIANGEN”植物基因组DNA提取试剂盒（以下简称“假日”）的方法。称为“天根套件方法”）。Biospin基因组DNA提取试剂盒（Cat＃BSC13S1）方法该实验未完全符合说明书，但在此基础上略有改进。要修改如下：（1）加入450μl500μlLP缓冲液。任选的步骤中，加入4μL的100mg /μL的RNaseA，并加入40μL的10mg /μL的RNaseA。（2）将浴在65℃的环境中加热15分钟，并在30分钟内更换15分钟。（3）加入150μLDA的缓冲液和200μLDA的缓冲液。（4）在“以10000×g离心30秒”的步骤10和11中，用“以10000×g离心1分钟”代替。略微调整实验方法和剂量后，使用“TIANGEN”植物基因组DNA提取试剂盒（Cat＃DP305-03）的方法提取基因组DNA。体的改进步骤如下：“加入液氮进行研磨，将粉末快速转移到装有700μLGP1预热缓冲液的预装离心管中，温度为65°C（GP1）预热，预热的硫醇乙醇加入到1％的终浓度）。
切换到”直接在砂浆中添加1400微升缓冲液预热GP1（预热，然后在补充有巯基乙醇的1.4微升至终浓度在GP1中1％，快速研磨直至样品完全液化（含水），用尖头混合物搅拌“。原始12000r更改为13000r，并在1分钟内通过离心30秒进行更改。
漂洗溶液中加入两次的PW量为600μL，第一次变为700μL，第二次变为500μL。用前将洗脱缓冲液TE通过65-70℃的水浴。测DNA质量用1×TAE缓冲提取的DNA，在1.0％琼脂糖凝胶上进行3μl电泳，拍照凝胶成像系统。析完整性。用紫外分光光度计测量DNA样品的纯度，浓度和完整性。RAPD反应使用上面制备的样品DNA作为模板，使用已筛选的10碱基对引物（表1）在Mastercycler proPCR仪器上进行RAPD扩增。增系统如下：总体积20μL，含有20ng模板DNA，0.2μmol·L-1引物和10μlPCRMagic Mix 3.0。增程序如下：预变性94℃5分钟，变性在94℃持续30秒，在37℃退火30秒，延伸90秒40℃，40次，和在72℃下，在4℃下8分钟，并存储存储将扩增的产物在1.2％进行电泳在琼脂糖凝胶上于5 V / cm的60分钟，然后在分析器检测到的凝胶图像和拍照。
机引物，MagicMix PCR 3.0等试剂购自福州瑞柏生物科技有限公司。果与分析基因组DNA的提取采用试剂盒形式的两种方法从牛蒡叶中提取基因组DNA：效果良好，浓度一般，可满足后续实验的要求。比于试剂盒的两种方法，Boiri试剂盒的提取的效果比天根试剂盒更好的：通过首先提取DNA条带更清晰，明亮，DNA浓度显著是大于第二个。验结果表明，采用两种方法提取的总DNA的OD A260 / A280比值为1.61，从2.10到并且该DNA产率是24至362毫微克/微升，这表明DNA含有较少的杂质和少量的RNA残基。多研究人员[7-8]发现基质中的少量RNA残基对RAPD的扩增没有影响，因此可以继续进行后续实验。Bozho试剂盒方法完全避免接触有毒试剂（如苯酚，氯仿），使其更安全，更方便。然天根试剂盒方法有巯基乙醇和氯仿的参与，但效率比传统的CTAB方法更快更方便。于牛蒡叶含有丰富的多糖多酚，很难提取ADN.Létape更难以提取Boiri套件包括提取上清液作为上清液是非常粘稠，会经常在中间。物质和底层液体一起吸出，导致DNA提取失败。此，建议在使用Boj试剂盒吸出上清液之前将混合物转移到Shredder离心柱中。年来，试剂盒方法发展迅速。具有以下优点：毒性小，效率高，操作简单，提取质量高等。着套件性能的提高，通用性的提高和价格的降低，套件的使用变得越来越重要。用。文中使用的两种套件在市场上相对常见。Bori试剂盒包含两种类型的产品：一种是Cat＃BSC13S1，另一种是Cat＃BSC13S1B，最后一种是另外的LP试剂和缓冲液。试剂在手册中指出“如果提取的富含多糖，对于苯酚的植物组织，请使用LP加缓冲液”。而，在实验过程中，发现LP缓冲液的使用优于LP加缓冲液，DNA浓度相对较高，OD值也较好。RAPD扩增结果从基因组DNA中随机选择总共10种不同引物的RAPD扩增结果。个引物可以扩增该DNA的清晰可区分的条带，表明提取的DNA适合于RAPD扩增分析。
实验还揭示了模板DNA中的少量RNA残基对RAPD扩增结果几乎没有影响。论和讨论许多高质量的DNA样本构成了分子生物学研究的基础，如限制酶消化，分子杂交，遗传多态性分析，PCR扩增和基因组学。此，快速有效的DNA提取是成功的第一步，但为DNA提取试剂盒的逐步商业化选择合适且具有成本效益的产品也很重要。于牛蒡叶含有许多多糖，蛋白质，叶绿素和多酚，叶子越老，含量越高，这使得牛蒡DNA的提取变得复杂。试在选择材料时选择年轻人。软的叶子。规的CTAB方法通常会有痕量的残留物，如氯仿，CTAB和异丙醇，这些残留物常常影响RAPD扩增的结果[9]。此，试剂盒方法的选择可以避免使用这些试剂，从而促进扩增。实验表明通过这两种方法中提取的DNA可以在随后的实验中使用，但一般而言，簸箕试剂盒的方法更有效，更方便的结果，
香樟树完全避免了与有毒的试剂和多个接触安全。
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