通过气相色谱和质谱法测定了三个桉树精油精油馏分（A1，A2和A3）的化学成分，然后测定了尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum f.sp.）的活性。检查了最佳的抗菌成分。丝和孢子的生长是通过对桉树精油的A3馏分及其主要单体成分（1，8-桉树油和α-萜品醇，参见上文）进行测试后确定的细菌确定的。文）。芽，电导率，糖和可溶性蛋白还原的特征以及抑制机理。果表明，桉树精油的三个精油馏分（A1，A2和A3）中有13种主要化学成分（相对百分数> 1％），其中A1， A2和A3分别是：6、8、12；在三个馏分中含量最高的是1，8-桉树油。同浓度的A3馏分及其主要单体组分对尖孢镰刀菌具有抗菌活性，在150 mg / L的浓度下其抑菌水平分别为90.46％，香樟84.40％和87.18％。
％。A3级分及其主要单体成分可分别显着改变尖孢镰刀菌菌丝的生长，孢子萌发，电导率，还原糖，可溶性蛋白和ATPase。一样它们主要破坏尖孢镰刀菌细胞膜的结构或功能，导致细胞膜通透性发生变化，导致细菌内外物质的不平衡，最终导致丧失正常的细胞形态和代谢功能，从而使其受到抑制。物精油是从花，叶，茎，根，果实等中提取的一种高挥发性植物的次生代谢产物，其成分通常由小分子，萜烯，醇，醛和酮组成。材料的组成，作用机理复杂，难以使病原体产生抗药性，在农林生物防治领域具有良好的应用前景[1]。物的精油来自大自然，对人体具有相对安全的特性，尊重环境和各种生物活动，因此农药研究人员和使用者寻求杀真菌剂是很常见的天然植物的光谱，高效和低毒。标[2]。樟（Cinnamomum longepaniculatum（Gamble）N.Chao）是蚜虫科的常绿树，是中国特有的一种，在国家一级被列为二级保护植物[3]。籽的所有部分都富含精油，并具有生理活性，例如抗菌[4-5]，抗炎[6-7]，镇痛[8]和抗癌[9]。前，关于油籽油的提取，组成分析和抗菌作用的报道很多，但是已经报道了油籽油的精油级分的抗菌作用。树油及其主要单体成分的抗菌机理尚未见报道。
此，作者使用尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）作为被测细菌，通过研究最佳的抗菌组分A3及其主要单体成分，比较了油性叶精油不同馏分的抗菌效果。孢镰刀菌。态，生理和生化的影响揭示了A3精油馏分及其主要单体成分的抗菌机理，为痰液杀菌剂的开发提供了理论依据。要材料和试剂测试材料：新鲜油叶于2018年10月中旬在江西省吉安市采集。试品种：尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum），由郑州京四维化工有限公司提供。于测试试剂：Tween-80，丙酮，PBS缓冲液，无水硫酸钠，ATPase试剂盒等。分析上都是纯净的。养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA培养基）等。要设备是由日本Shimadzu公司生产的ShimadzuGCMS-QP2020质谱仪，这是由上海Boxun Industrial Co.，Ltd.生产的全自动高压釜。; DHP-9052电恒温电加热恒温箱，上海宜恒科学仪器有限公司；成立苏州安泰空气技术有限公司生产超净水SW-CJ-2F。过蒸汽蒸馏进行精油各部分的提取和制备，以从新鲜的油叶中提取精油。后收集一定量的叶精油，用无水硫酸钠干燥，放入分馏瓶中，然后在减压下（-0.073 MP）进行分馏。集了三种不同的温度馏分，即：低于60°C的馏分，标记为A1号精油，60至100°C的馏分，指定为A2号精油，100至150°C的馏分，
香樟油基本编号A3。油各部分的主要化学成分分析（1）色谱条件：石英毛细管柱Rxi-5Sil MS（30 mx 0.25 mm x 0.25μm），载气为高氦气纯度（99.999％），流速为1.0 ml / min。化室的温度为220℃，塔的初始温度为50℃（持续2分钟），以8℃/ min的速率将温度设定为160℃。8°C / min的速度升至250°C（保持15分钟）以完成测定;比例为20：1，进样量为0.5μL。（2）质谱条件：离子源为EI，电子能量为70 eV，离子源温度为220.0°C，入口温度为250扫描范围为60-350 m / z。过取三份桉树精油（A1，A2和A2），即50μL，100μL，150μL，200μL和25μL，来确定每一馏份精油的抗菌活性。升，然后获得桉树精油的三个精油馏分。胞为2μL/ mL，4μL/ mL，6μL/ mL和8μL/ mL PDA培养基，并铺有纯PDA作为对照。尖孢镰刀菌的菌丝体接种在培养皿的中央，重复3次，在5℃下孵育5天后，拍摄照片，算出抑制率。定受试细菌的菌丝体生长活性用生长抑制率法[10]确定A3组分和主要单体成分对尖孢镰刀菌生长的抑制作用。无菌条件下，将9 ml PDA培养基倒入每个培养皿中，然后加入1 ml精油馏分A3及其主要单体成分，然后向对照组加入1 ml丙酮并轻轻摇动以形成板。却并固化后，将均匀的生长饼（d = 5.0 mm）放入每个盒子中。复3次并在25-26℃下培养7天后，通过杂交法测量菌落的生长直径，并计算菌丝体生长的抑制率。
定被测细菌的孢子萌发率[11]取100μL尖孢镰刀菌悬浮液，浓度为1×10 5 cfu / mL，并加入0μL，25μL，50μL，100μL，用吐温80。PDA培养基中150μL馏分A3及其主要单体组分，每盘15 mL。匀涂布后，立即密封培养皿，并加入少量不含A3的Tween-80板及其主要单体组分作为对照。生化培养箱中于27°C孵育9小时后，在显微镜下观察细胞，并根据公式计算孢子萌发率。过电导率法测定待测细菌的细胞膜通透性[12]。50 ml液体PDA培养基中除去尖孢镰刀菌丝，并在140 rpm（140 rpm）下搅拌2天，然后过滤并用0.05 mol / L PBS缓冲液洗涤3次。pH 7.2。移至20 ml PBS缓冲液中，添加不同浓度的A3馏分及其主要单体成分，置于振荡器中并继续振荡，取样4小时，离心（4000 rpm，10分钟）以除去细菌液体，上清液测量电导率。不含级分A3及其主要单体组分的细菌液体用作空白对照组（CK）。测细菌液中还原糖含量的测定[13]在PDA培养基上培养尖孢镰刀菌，然后在第三天将菌丝覆盖整个平板，取5块蛋糕用5毫米穿孔器。治疗组和对照组置于100 mL液体培养基中，并向治疗组中加入60μL相同浓度（150 mg / L）的A3馏分及其主要单体成分。照组中加入相应的无菌蒸馏水，并将混合物置于振荡状态。养在盒子中进行，并在每个时间间隔确定样品中的还原糖含量。测细菌液中可溶性蛋白含量的测定[13]在PDA培养基上培养尖孢镰刀菌，然后在第三天将菌丝覆盖在整个培养皿中，并用5块滤饼5毫米穿孔器。100 ml液体培养基，确定的治疗组和对照组，60μL具有相同浓度的馏分A3（150 mg / L）及其主要单体成分的治疗组，将对照组添加到水中培养培养基，并以25℃，140rpm的间隔测量样品的蛋白质含量。定待测细菌的ATPase活性将1 mL孢子悬浮液（106 CFU / ml）接种在50 mL PDA培养基中，并加入相同浓度（150 mg / L）的A3组分及其主要成分。搅拌下（28℃，180rpm），用无菌水作为空白将单体成分培养42小时。隔2 h取1.5 ml，离心10分钟（4°C，12000 rpm），除去上清液，收集菌丝体，将细胞破碎。速组织和消除上清液。试剂盒可测量ATPase的总活性。期通过GC-MS分析了香精油的主要化学成分。量了桉树油的三个馏分（A1，A2和A3），结果显示馏分A1的主要化学成分（相对于100）有六种类型的馏分> 1％ ：2-甲基-5-（1-甲基乙基）-双环[3.1.0] -2-己烯，α-蒎，4（10）-侧柏烯，β-pine烯，β-月桂烯和1，8-桉树油； A2中的8种主要化学成分（相对百分比> 1％）：2-甲基-5-（1-甲基乙基）-双环[3.1.0] -2-己烯，α稀释，4（10）-芳烃部分， β-pine烯，β-月桂烯，（ ）-4-癸烯叔萜烯和1，8-桉树油;馏分A3包含13种主要化学成分（相对百分比> 1％）：α-蒎，4（10）-芳烃，β-癸烯，β-月桂烯，（ ）-4-癸烯，D-柠檬烯，γ-萜品烯，石竹烯，香叶基B，1，8-桉树油，松油烯4醇和α-松油醇。三个馏分的最高含量是1，8-桉油精，其次是4（10）-py和α-肟。种精油馏分对尖孢镰刀菌的抑菌活性：桉树叶精油馏分（A1，A2和A3）对尖孢镰刀菌具有一定的抑制作用，并随着增加每个部分的浓度。显。浓度为8μL/ mL时，对尖孢镰刀菌的抑制作用最为明显：抑制率分别为79.09％，85.51％和89.81％（表1），而桉叶油的精油级分A3的抗菌率是该级分的。A1和A2是1.14和1.05。制尖孢镰刀菌菌丝体的生长活性示于表2中。油A3，α-松油醇和1，8-桉树油油片对油菜的部分抑制作用。孢镰刀菌的菌丝生长。果，其中组分A3对尖孢镰刀菌具有更大的影响。相同浓度（150 mg / L）下，油性叶精油中A3、1，8-桉树油和α-萜品醇级分对尖孢镰刀菌的抑制作用呈递减顺序> α-松油醇> 1，8-桉树油，并且随着A3馏分浓度的增加，α-松油醇和1，8-桉树油增加，从而增加了抑制作用。尖孢镰刀菌孢子萌发速率的影响根据1.3.4.2的实验方法，在不同体积的A3，α-萜品醇和8桉。算出芽的数目并计算出发芽率。果示于图3。2.从图2可以看出，当每个A3馏分α-萜品醇和1，8-桉树油的体积增加时，发芽数连续减少，发芽率也降低，表明组分A3，α-松油醇和1，8-桉油醇对尖孢镰刀菌孢子的萌发具有一定的抑制作用。含有A3的培养基中，孢子发芽率最低，其次是α-松油醇，最后在含有1，8-桉油醇的培养基中。尖孢镰刀菌的膜渗透性的影响在图2中示出。3.由于级分A3，α-松油醇和1，8-桉树油的抗菌成分的浓度增加，因此尖孢镰刀菌中的电导率很重要。有抑菌成分的对照组的电导率变化很小。A3馏分的最大电导率为69.03μS/ cm，这表明A3馏分的化学成分之间具有明显的协同抗菌作用，并且离子外通量是最重要的。导率的变化表明抑菌成分会改变细胞膜的通透性，直接导致大量内部物质（例如钾离子，钠离子等）流动，从而影响细菌的正常生长。菌的目的。图2中说明了对尖孢镰刀菌的还原糖含量的影响。图4可见，从0小时起，在处理A3级分，α-萜品醇和1，8-桉树脑以及对照组（CK）后，镰刀菌悬浮液中的还原糖含量趋于降低然后增加可能是因为尖酸镰刀菌经过数代的消耗已经消耗了少量的还原糖来还原它，这是由于馏分A3及其主要单体。些成分抑制了尖孢镰刀菌的生长和繁殖并破坏了尖孢镰刀菌的细胞膜，因此较高分子量的还原糖可以通过细胞膜排出，导致糖含量增加。速。尖孢镰刀菌蛋白质含量的影响如图5所示。级分A3，α-松油醇和1，8-桉油精作用下，尖孢镰刀菌菌株的蛋白质含量不是抑菌的。组分的细菌液体略高：在相同浓度（150 mg / L）下，A3，α-萜品醇和1，8-桉树油的含量随时间增加，并且液体中的蛋白质含量增加细菌减少。因可能如下：首先，随着抗菌成分的作用随着时间的流逝而降低，而剩余的尖孢镰刀菌继续生长，细菌液中的蛋白质被正在生长的尖孢镰刀菌所消耗。次，由于细菌自身对细胞膜的修复，减少了蛋白质泄漏，并且渗出的蛋白质不足以补偿细菌液体中蛋白质的消耗。150 mg / L时，组分A3，α-松油酚和1，8-桉素醇分别作用8h，细菌溶液中的蛋白质含量达到13.82％，12.63％和11.97％。
别。尖孢镰刀菌的ATP酶活性的影响示于图6。0至2小时的时间内，级分A3，α-松油醇和1，8-桉油精与对照组（CK）为用4种孢子处理。刀菌中的ATPase活性降低，可能是因为ATPase被用来分解ATP释放能量以在初期维持尖孢镰刀菌的生长，从而降低其活性。2-4小时内，尖孢镰刀菌中的ATP酶活性呈上升趋势，这可能是由于该阶段为ATP合成阶段，消耗较少的ATP酶4小时后，它受到组分A3，α-松油醇和1，8-桉树油的影响。ATP活性的下降可能是由于当时ATP合成量的下降，因此ATPase含量也呈下降趋势。树精油的三个精油馏分主要包含醇化合物和烃化合物。些化合物广泛用于调味剂和香料，制药和食品工业领域。如，桉树油1.8是世界上10种最重要的精油之一，抗菌性最强[14-15]，杀虫剂[16]，风热，痰湿和排毒，而且还用于各种药物。好的透皮渗透性[17]。α-松油醇可用于制药，农药，塑料，肥皂和其他行业的调味剂配方，并且是玻璃器皿着色的极佳溶剂[18-19]。Α-蒎是合成樟脑，松油醇，香料，树脂和其他化学品的重要原料之一。
]。外，桉树精油的精油馏分还含有某些化学成分。效果尚不清楚，需要进一步研究。述抑菌活性物质是从天然植物的香精油中分离纯化得到的，直接用于对照中，因此可以得到能够有效地控制培养物的致病性真菌病而不损害环境或动物的药剂。他生物，不仅扩大了丰富的植物。油资源的利用还可以创造一种新的生物防治农作物疾病的手段[2]。虫属于蚜虫科，富含精油。该实验中，研究了香精油馏分A3及其主要单体组分的抗菌活性，结果表明，馏分A3和主要单体组分均具有一定的抗菌活性，馏分A3效果最好，可能是由于分数所致。A3是各种抗菌成分协同抗菌作用的结果。此，可以将其作为新的杀菌物质进行研究。油馏分A3及其主要单体成分可以显着改变生长，孢子萌发，电导率，糖的还原，尖孢镰刀菌蛋白和ATPase的活性，但是变化很大。变点不同。尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）被抑制生长时，细胞膜的结构被破坏，细胞保护被破坏，内部的小分子被渗透，导致培养液的电导率增加。低平均分子量的糖的延伸被释放到细菌液体中，破坏了细胞结构。
段时间后，细胞的细胞结构被完全破坏，因此大分子物质（如蛋白质）也完全溶解在细菌液中。时，ATP酶活性也相应地改变，从而抑制细胞的作用。国的油烟资源丰富，资源浪费非常严重。了解决我国油烟资源的整体开发利用问题，深化处理是关键。桉树油中A3精油馏分及其单体成分的抗菌活性和机理的研究进一步拓展了蝎油在桉树油中的开发和应用。为一种芳香药用物质，可以增加油基糯米产品的附加值，并促进当地经济发展。有重要的现实意义。
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