[目的]研究成熟桉树种子保存的最佳方法。[方法]对桉树种子的低温保存进行了正交试验，探讨了成熟桉树种子保存的最佳方法。[结果]在冷冻保存过程桉树种子的最佳水分含量为26％，二甲亚砜15％在桉树种子的冷冻保存的最佳冷冻保护剂中的一个;它对桉树种子的冷冻保存特别有益。冻方法是缓慢冷冻和缓慢解冻。
[结论]该研究为研究桉树种子的低温保存提供了理论依据。着原始森林面积的急剧下降，大量的物种遗传资源不断丧失，特别是木本种植资源，因此木本种植资源的保护已经开始越来越受关注种子是木本植物遗传资源中最常见和保存最完整的材料之一，在保护珍稀物种方面发挥着越来越重要的作用。而，稀有树种的种子大部分是顽拗型种子，常规方法难以长期保存，而顽拗型种子的低温保存已成功多次[1-4]。者使用的正交试验进行冷冻保存桉树种子和测量存储种子和脱氢酶分离胚胎探索的保护的方法和最有利的条件下的测定的电导率保存过程中的种子活动。桉树种子的长期贮存提供科学依据。该实验中使用的种子是从单个桉树植物收获的成熟果实，20-30岁，具有强壮的生长并且没有病虫害。对测定含水量。
据国际森林种子检验（SIAT），
香樟树通过在105℃下干燥8小时来测定绝对含水量。定实际含水量。
组选择10个大小均匀的桉树种子，没有任何损伤，每组梯度分3组，即总共12组，放入30℃的烘箱中加入硅胶，将含水量降低到33％。26％，20％，14％。测试还测量种子的绝对含水量，其通常在脱水期间被替换。际含水量通过重量损失法计算：ω1= 100％ - [原始重量×（100％ - 相对含水量）] /最终重量。解冻程序桉树种子的冷冻保存的解冻冷过程示于图1.选择大小均匀，醇厚，10个种子有无破损，
香樟树称量它们，用水洗身轻拍，用蒸馏水冲洗几次，用滤纸吸干浮水，加入50 mL试管和10 mL蒸馏水浸泡。DDS-307电导率仪对应于初始值（a1），首先测量电导率。后每4小时测量电导率（a2）。录水的温度直至24小时结束。
后，将浸泡溶液在沸水中与种子一起煮沸15分钟，并在冷却至25℃后，测量电导率（a3）。籽蒸馏水用作空白。后，在25℃转换，电导率：25℃电导率=电导率×[1 0.02×（t-25）] [6];根据下式计算相对电导率：相对电导率Sr（％）= S1 / S2×100，其中S1是25℃时的电导率，S2是绝对电导率。
3个重复的待测种子，每次重复20粒种子，在45°C的热水中浸泡24小时（以增加分离胚胎的呼吸强度，使其快速变色），取将胚胎置于10毫升试管中，加入5毫升。mL溶液0.1％TTC，软化，在37℃，黑暗，完全染色，倾倒的TTC溶液中染色8小时，并用蒸馏水漂洗3次。后，通过加入丙酮和少许石英小心地压碎样品。浆液倒入2ml管中，用丙酮定容。管以4000rpm离心10分钟。用Model 72-1分光光度计在490nm处获取上清液以确定光密度（OD）的值，并根据曲线确定相应还原态的TTC含量。
准。据L16正交试验（42×25）的设计，含水量为33％，26％，20％，14％，有4种不同的水平梯度，冷冻方法包括快速冷冻和慢速冷冻，解冻方法包括快速解冻和慢速。冻;冷冻保护剂由二甲基亚砜，蔗糖和乙二醇组成，质量分数为5％，10％，15％，20％和5％，10％，实验方案如表1-2所示。胞结构的完整性是种子活力的基础[7]。
种子成熟恶化，细胞膜被破坏或甚至分解，膜的渗透性增加，电解质和吐露浸没液体中的水的增加[8]的导电性，所以相对含水量越高，种子的活性越低。氢酶是在呼吸过程graines.Son活性的重要还原酶是密切相关的种子的发芽[9]和与呼吸graines.La OD值的强度可能反映了正相关脱氢酶的活性。加上种子活动很强。3和表4表明，无论是测量相对电导率还是测定TTC含量，B（含水量）的R值最高，水含量对两者都有显着影响，表示种子冷冻保存期间的含水量。响是最重要的。B2和B3，当种子的含水量在20％和26％之间时，种子在冷冻保存后具有更高的活性。LSD比较结果表明，B2和B3对结果的影响非常重要。体而言，桉树种子超低温保存过程中种子的最佳含水率为26％。表3中，通过分析相对电导率，冷除霜方法的R值分别为31.38和17.86，表明冷除霜方法对种子的相对电导率有很大影响。树。
4中冷冻方法的R值为12.21，P <0.05，效果达到显着水平，而解冻方法对结果的影响不显着。表明只有冷冻方法对桉树种子的TTC含量有很大影响。表3中，C2的冷冻保存的种子（即在慢速冷冻模式中）具有相对低的相对电导率和高的种子活性，而在表4中，慢速冷冻方法表现出来。TTC含量和更高的种子活动。3的解冻模式K1> K2表明D2的相对电导率，即慢速解冻方法，在冷冻保存后较低。之，种子冷冻保存的最佳解冻方法是缓慢冷冻和慢速融化。分析方差时，发现因子E和F的P值大于0.05，无论相对电导率或TTC含量如何，因此冷冻保护剂中的蔗糖和乙二醇含量在该实验中对桉树种子的冷冻保存几乎没有影响。
子A方差分析的P值小于0.05，表明因子A（二甲基亚砜含量）对桉树种子的冷冻保存具有显着影响。3中因子A的K值最小，表明A3的相对电导率较低。过LSD分析，A3和A2和A4的P值分别为0.003和0.018，P值A3和A1为0.401，效果不显着。
表明当二甲基亚砜含量为A1或A3（即5％或15％）时，种子在冷冻保存后具有高活性。表4中，与LSD相比，A3和A1的p值为0.023，并且效果达到显着水平，表明A3（即15％二甲基亚砜）低于桉树种子冷冻保存过程中的二甲基亚砜含量。子活动受到更好的保护，为5％。体而言，15％二甲基亚砜是用于冷冻保存桉树种子的最佳冷冻保护剂。过正交试验确定冷冻保存后桉树种子的相对电导率和脱氢酶活性（TTC含量），表明贮藏物质（包括种子和切除的胚胎）的含水量是冷冻保存成功的决定因素。度脱水可以防止或减轻冷冻保存和解冻时由于低温下的损害，这是关键的冷冻保存顽拗型种子的成功，这是关键到冷冻保存成功[10-12] 。冻方法和解冻方法的选择是在冷冻保存期间控制自由基冷却和温度升高，并且是冷冻保存的辅助手段。
冻保护剂对温度的过程中非常低的温度过程中的突然变化的好缓冲效果，但是作为冷冻保护剂本身对材料类型和适当浓度的毒性作用的关键是防冻剂的选择。研究探讨了在非常低的温度下保存桉树种子的最佳条件：发现有中度脱水桉树种子26％的湿度是由含有15％的冷冻保护剂保护二甲基亚砜，然后缓慢冷冻和缓慢解冻。方法可以在冷冻保存期间使细胞损伤最小化并保持种子活性。前，低温保存作为种子保护的重要技术，具有非常广阔的应用前景。冻保存是最好的储存方法，特别是对于顽拗型种子，因为它易于使用，投资成本低，基因保护稳定，易于出现新的抗寒品种。于成功保存顽拗型种子的报告也已发表[3，13]，但该研究尚处于起步阶段，在种子冷冻保存过程中仍有许多问题需要解决，如低贮存后存活，形成正常幼苗困难。待
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